内参即是内部参照（Internal control），是指在组织和细胞中表达相对稳定的一类蛋白质，通常由管家基因编码。这些蛋白质被用作检测蛋白表达水平变化时的参照物，以确定实验的准确性和可重复性。

在Western Blot实验中，我们使用内参其实就是使用与内参对应的抗体来检测内参的表达量。由于内参在不同组织和细胞中的表达量相对稳定，通过检测每个样品内参的表达量，我们可以校正上样误差，从而获得更可靠的半定量结果。使用内参还可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全，并检查该实验中的显色或发光体系是否正常。通过选择合适的内参，可以将这些样本之间的差异消除或最小化，减少实验误差，提高结果的可靠性和可重复性。因此，选择合适的内参是Western Blot实验的关键步骤之一。

根据所做的蛋白样本的种属确定，哺乳动物一般β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Na+/K+-ATPase等；植物样本一般选择Plant actin、Rubisco等；其他来源样本应参考文献报道选合适蛋白作为内参。

根据研究对象的不同，选择不同的内参对于检测细胞中不同位置的蛋白非常重要。一般情况下，选择β-actin和GAPDH作为总蛋白的内参就可以满足要求。然而，对于细胞质、细胞核、细胞膜等不同位置的蛋白检测，我们需要选择相应的内参，以确保实验结果具有科学性和可靠性。常用内参抗体分子量及其定位情况如下：

在选择内参抗体时应考虑目的蛋白分子量大小，通常要求目的蛋白与内参蛋白分子量相差5kDa以上。例如，若检测的目的蛋白分子量为45kDa，则不宜选择分子量为42kDa的β-actin作为内参，应考虑选择分子量为36kDa的GAPDH作为内参。

在实际的实验环境中，处理条件可能会影响一些内参的表达，因此需要考虑研究的信号通路是否会对内参的表达产生影响。例如，在糖代谢的研究中，不能使用GAPDH作为内参，因为GAPDH是参与糖酵解过程中的酶，在某些细胞中，缺氧等条件会改变GAPDH的表达；在凋亡实验时，Lamin等也不适合作为内参；在加入抗有丝分裂和抗真菌药物时，Tubulin的表达易受影响，不适合作为内参等。因此，在设计实验方案的时候应考虑这些因素并参考相关文献，在实验过程中，还需要留意内参表达是否出现异常等因素的考虑。