酶联免疫吸附试验（ELISA）

是酶免疫测定技术中应用最广泛的技术

ELISA Kit的诞生

帮助科研工作者省掉了繁琐的实验过程

提高了科研效率！

选对试剂盒

配合好的实验技巧

会让实验效率事半功倍~

那么如何挑选合适的ELISA试剂盒？

↓↓↓今天小鹿就来告诉你❤

1 查找待测样本的蛋白浓度范围

参考数据库：通过NCBI、UniProt、Pax-Db等数据库查找目标蛋白的表达量参考值，确保试剂盒的检测范围与参考值一致。

2 试剂盒的应用种属和检测样本种类

种属特异性：不同种属的样本通常不能通用，除非试剂盒特别说明。

样本类型：常见的样本类型包括血清、血浆（不同抗凝剂）、细胞上清和细胞裂解液，不同样本可能需要不同的试剂盒，要先确保试剂盒适用于您的样本类型。

3 试剂盒的检测范围

标曲范围：确保待测样本的浓度落在试剂盒的标准曲线范围内。对于高浓度样本，建议先进行预实验以确定合适的稀释倍数。由于样本之间存在个体差异，一般建议选择4个以上的样本进行预实验，以确定最佳稀释倍数。

4 试剂盒的灵敏度

选择适合待检指标含量的灵敏度，低含量指标需选择高灵敏度试剂盒。

1 样本的准备

新鲜样本：尽量使用新鲜样本，避免使用溶血、溶脂、保存时间过长或凝固不全的样本。

保存条件：如果不能立即测定，5天内应4℃保存，1周后检测的样本应低温冻存，避免反复冻融。

2 仔细阅读说明书

熟悉流程：推荐画出简要步骤图，提前准备试剂，浓缩试剂提前配制工作液。

批次一致性：不同批次的试剂不要混用，检查各组分的有效期。

3 预包被酶标板和试剂组份的平衡

室温平衡：预包被的酶标板条和各试剂组份需室温平衡30分钟以上，以确保反应微孔内的温度达到所需温度，避免弱阳性样本漏检。

4 待测样本加样

分批操作：样本过多时建议分批操作，提前做好稀释。

加样技巧：控制加样时间，避免误差；垂直加入孔底，避免接触孔壁；使用一次性移液头，防止交叉污染。

5 孵育和洗板

孵育条件：根据说明书选择孵育时间和温度，为了避免温度不均，尽量采用恒温孵育箱进行孵育。

洗板技巧：手工洗板时垂直拍板，避免交叉污染；洗板机洗板时检查冲洗头是否通畅。

6 显色

显色条件：TMB作为底物反应溶液，需要量取所需的量进行添加，禁止全部倒出后再将余量倒回，37℃反应20分钟（可酌情缩短或延长孵育时间，时间不超过30分钟），显色反应需避光。

7 读数和数据分析

及时读数：终止反应后15分钟内读取结果，酶标仪需预热15-30分钟，注意选择合适的波长进行读数。