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Westernblot实验蛋白提取
贴壁细胞总蛋白提取： 用TBS缓冲液润洗贴壁细胞2-3次，最后一次尽量吸干残留液。加入适当体积的细胞总蛋白提取试剂(使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂)于培养板/瓶内裂解3-5min。期间反复晃动培养板/瓶，使试剂与细胞充分接触。用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5mL离心管中。冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。4℃13000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。 悬浮细胞总蛋白提取： 低速离心收集细胞，加入适当体积的冷却的PBS缓冲液重悬，2000rpm离心10min，吸除上清。重复以上操作两次，收集细胞沉淀。加入适当体积的细胞总蛋白提取试剂(使用
2021-08-14
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引物干粉使用说明
(1)引物干粉开盖前13000rpm，室温离心1min。 (2)加入管壁上10倍nmole数值的水(μL)的DEPC水，涡旋混匀，瞬时离心。此为引物储备液(100μM)，用后于-20℃保存。 *引物管上一般是3.0~6.0nmole，加入十倍这个数值微升的水(30~60μL)。 (3)取一新1.5mL EP管，加入380μLDEPC水，上下游引物储备液各吸取10μL于新EP管中，涡旋混匀，瞬时离心。此为引物工作液(2.5μM)，可直接用于实验，用后于4℃保存。
2021-08-14
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